HPLC에 대한 기본적인 원리에 대해 배웠고, 장비를 직접 사용함으로써 분석할 수 있었음.   알약 정제에 들어있는 APAP, 카페인 양을 HPLC 장비로 분석하며 표준액과 비교함. 표준액 제작 시 희석 배수가 왜 이렇게 진행되는지에 대해 생각해봤고, 실제 샘플과 동일한 조성으로 제작될 수 있도록 시약의 양이 설정된 것임을 알 수 있었음.   처음으로 샘플을 분석했을 때는 Benzoic acid의 양이 매우 낮게 측정됨. 그 이유로 샘플액 제작 시 benzoic acid로 제작한 내부 표준 용액이 아닌 표준액으로 잘못 넣어 데이터가 정확하게 나오지 않았음. 다시 실험을 진행했을 때는 샘플 및 표준액을 제작하면서 장비 안정화를 동시에 진행했고, 용액을 만드는데 있어서도 과정을 미리 파악해두었기 때문에 더 빠른 속도로 진행할 수 있었음. GMP 규정에 맞춰 샘플을 기록하며 투입하다 보니 다시 실험했을 때는 시약의 종류나 양을 혼동하지 않고 정확한 실험 용액을 제작할 수 있었음.   실험 결과는 적정 범위 내에서 분석되었으나, APAP양이 상대적으로 낮게 측정됨. 그 이유로는 검액 제조 시 검액원액에서 충분히 sonication을 하지 않아 분산이 덜 된 상태에서 추출했기 때문에 더 적은 APAP가 장비에서 검출된 것으로 보임.    장비 사용 방법에 대해서만 생각하고 처음 수업에 임했었는데, 장비 사용 이전에 샘플을 제작하는 과정까지가 업무에 포함된다는 것을 느꼈고, 많은 샘플을 제작해야 하기 때문에 빠른 속도를 많이 요하는 업무임을 느꼈음.

종합후기: 난이도 중상 이상. 시간 소요 오래 걸림. 다만 실험실에서 배우는 세밀한 주의사항이나, 실제로 해 봐야 아는 것들을 익힐 수 있어서 좋았습니다. 특히 본인이 손재주가 안좋은 사람은 경험해보았으면 좋겠습니다.   1일차: HPLC 사전 경험 없음. 학습 목적: 이직 목적, 사전에 이론 강의는 온라인으로 수강했으나 실무에 적용하기 어려웠습니다. 각각 시험 단계 별로 처음에 유기적으로 연결이 안되서 이해하는데 어려웠고, 각 단계 별로 주의사항 등을 인지하고 있어야 해서 실험이 뚝뚝 끊어졌었는데 이직 전에 여기서 미리 경험하고 가서 정말 다행히라고 생각합니다. 특히 타 업계 종사자로서 경우 볼 플라스크, 홀 피펫을 사용할 경험이 없었는데 실제로 경험해볼 기회가 되서 좋았습니다. (다만 아직도 저 둘은 표선 맞추기가 어려워요 ㅠ) 신입 분들의 경우 미리 교육을 듣고 가면 회사에서 적응을 빨리 할 것이라고 생각합니다. 첫날 이해가 어려우니 버버벅 대고, 버버벅 대다 보니 나중에 허겁지겁 실험을 하게 되는데 미리 집에 늦게 간다고 생각하고 여유 있게 진행하면 될 것 같습니다. 1일차 끝나고 집에가서 실험 내용 복기랑 계산식 이해를 시간을 투자 해서 했는데 2일차 이해해 많은 도움이 되었습니다.   2일차: 1일차 엉망징창 시험 후 집에서 복기 및 잘못한 사항 파악한 후 진행. 시험은 어제보다 훨씬 빨리 진행했으나 그래도 오래 걸려서 4시간 정도 소요되었습니다. 2일차 중점은 실제 계산 및 HPLC 진행하는 것인데 엑셀 사용 경험이 좀 있으면 도움이 된다고 생각합니다. 특히 HPLC 결과를 어떤 식으로 레포트 형식으로 변환하는지, 각 단계별로 프로그램 만져보는 것이 좋았습니다. (IM -> MS -> PM) 순으로 계속 진행해야되는데 이 부분도 실무 들어가기 전에 한 번 만져봤다는 사실이 좋았습니다. 2일차에서는 최대한 실험 시간을 단축하여 진행했는데도 시간이 오래 걸렸고, 마무리 정리 및 설거지에도 만만치 않은 시간이 걸리기 때문에 실제 실무 환경도 잘못하면 집에 늦게 가겠구나를 배울 수 있었습니다. 2일차 복기 시 데이터 레포트를 보고 데이터 해석을 위주로 진행하려고 합니다.

실습 수업을 수강하기 전에 교육에서 진행되는 함량 시험을 처음부터 끝까지 잘 해낼 수 있을까 걱정이 많이 되었습니다. 하지만 선생님 두 분께서 시험 과정과 기기에 대한 설명도 자세히 해주시고, 함량 시험을 직접 진행하면서 생기는 여러 질문들에도 친절하게 잘 답해주셔서 모든 과정을 잘 익힐 수 있었습니다. 또한 제가 제조한 샘플 3개 중 하나가 함량이 낮게 나왔었는데, HPLC를 통해 얻은 데이터를 통해 왜 이런 결과가 나왔는지, 시험 과정에서 어떠한 실수가 있었는지 생각해보고 부족했던 부분을 숙지할 수 있어서 의미있는 경험이었습니다.   1일차 이동상 부피 계산 = 유량 x 런타임 x 총 주입 횟수 한 시퀀스 = [Blank - STD - Sample - STD(BRK)] 시험 기록서와 로그북은 시험 중 실시간으로 적어야함. HPLC로 표준액을 측정했을 때, 분리도는 1.4 이상, Tailing은 1.2 이하, RSD(상대표준편차)(%)는 2.0% 이하인지 확인한다. 2일차 함량 계산[STD] : [SAMPLE] = STD(area) : SAMPLE(area) 피크 순서 = 극성이 큰 물질의 피크가 먼저 나온다. 이동상이 부족할 때 나타나는 트러블 = 로스트 프라임이 때, Dry Prime 기능을 사용해야 함.

이전에 다른 기관에서 HPLC 교육을 받은 경험이 있었지만, 당시에는 연구원분이 대부분 과정을 진행하셨기 때문에 직접 수행해 볼 수 있는 부분이 많지 않았다. 반면 이번 실습에서는 HPLC 시험의 전 과정을 직접 수행해 보면서 기기를 다루는 방법뿐만 아니라 시료 및 표준액의 조제, 시험 과정 등 전반적인 시험 방법을 익힐 수 있었다.   0일차 실습 전 가상 시뮬레이션 프로그램을 통해 실습에서 수행할 시험의 이론과 방법을 미리 학습하였다. 실제 실습에 앞서 시험의 목적과 과정, 각 단계에 수행해야 할 작업을 미리 확인할 수 있어 다음날 진행할 시험을 구체적으로 예상하고 준비할 수 있었다.   1일차 본격적인 시험에 앞서 이동상과 Solution A를 먼저 제조하고 HPLC를 준비하였다. 준비하는 과정에서 제조한 이동상을 기기에 연결하고 시험에 필요한 메소드를 입력하는 작업 등이 포함되었다. 특히 기억에 남았던 것은 HPLC의 유속을 설정하는 과정이었다. 이번 시험에서는 최종적으로 높은 유속을 사용해야 했지만, 처음부터 높은 유속으로 설정하지 않고 낮은 유속에서 시작하여 단계적으로 높여 주었다. 일반적으로 처음에는 약 1 mL/min 정도의 낮은 유속으로 시작한 후 필요한 유속까지 점차 높여 주는데, 이는 갑작스럽게 높은 유속을 적용하여 기기에 가해지는 부담을 줄이고 안정적으로 작동시키기 위한 과정이라는 것을 배웠다.   2일차 2일차에는 전날 배웠던 시험을 처음부터 끝까지 스스로 수행해 보았다. 전날 한 번 직접 실습해 본 경험이 있었기 때문에 1일차보다 각 과정이 익숙해졌고, 다음에 어떤 작업을 해야 하는지 미리 생각하면서 보다 수월하게 실험을 진행할 수 있었다. 처음에는 낯설게 느껴졌던 과정도 직접 반복해 보니 점차 익숙해졌으며, 직접 처음부터 끝까지 수행한다는 점에서 더욱 재미있게 실습할 수 있었다. 또한 전날 시험을 통해 얻은 데이터를 이용하여 결과를 계산하는 방법도 배웠다. 단순히 시험을 수행하는 것에서 끝나는 것이 아니라, 얻어진 데이터를 어떻게 계산하고 결과를 확인하는지까지 배울 수 있어 HPLC 분석의 전체적인 과정을 이해하는 데 도움이 되었다. 계산 과정에서 이해하기 어려운 부분도 있었지만, 강사님께서 직접 설명해 주시고 함께 실습한 분들과 과정을 비교하며 배우면서 혼자 공부할 때보다 내용을 더 쉽게 이해할 수 있었다. 이를 통해 모르는 부분을 질문하고 다른 사람과 함께 확인하며 배우는 과정이 실험을 정확하게 이해하는 데 도움이 된다는 것을 느꼈다.   QC 업무를 희망하는 사람이라면 HPLC 시험 과정을 직접 경험해 볼 수 있는 기회이기 때문에 한 번쯤 참여해 보는 것을 추천하고 싶다. 이론으로만 배웠던 분석 과정을 직접 수행해 보면서 QC 업무에 필요한 실험 과정과 정확성의 중요성을 이해하는 데 도움이 될 것이라고 생각한다.